冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定的硬度，然后進行切片的一種方法。制作過程較石蠟切片快捷、簡便，因而多應用于手術中的快速病理診斷。

腦組織冰凍切片的制作步驟

1、固定。大鼠或小鼠灌注取腦，取腦后用多聚甲醛浸泡固定，即能達到?jīng)_洗的目的，又不損害組織。

2、脫水。先后用15%，20%，30%的PB蔗糖溶液 進行腦組織梯度脫水，腦組織沉下去就是脫水好了。

3、冰凍切片，推薦瑞沃德冷凍切片機。取出腦組織，用OCT膠包埋，一層層的包埋，注意:不能有氣泡，否則營銷切片；不能留有空隙否則會凍壞腦組織。冰凍切片的溫度是-18℃～-25℃之間都可以的，腦組織最好是-18℃。

冰凍切片免疫熒光實驗步驟

1、組織用4%多聚甲醛固定6-8小時，轉至20%蔗糖溶液至組織沉底。

2、冰凍切片8-10μm，推薦瑞沃德冷凍切片機，溫度穩(wěn)定，切片質量高。室溫放置30分鐘以上防脫片，-20℃保存。從冰箱拿出的冰凍切片在室溫放置30分鐘以上再進行免疫熒光。

3、1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

4、用2%BSA室溫或37℃封閉1小時。

5、一抗4℃孵育過夜。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

6、二抗室溫或37℃，避光孵育1小時。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

7、DAPI染色。1xPBS洗3次，每次3-5分鐘。

8、滴加防淬滅劑，封片。

瑞沃德冷凍切片機最大的優(yōu)勢是智能恒溫，全開窗切片超過3小時以上，箱體溫度波動不超過2℃，使用者再也不需要半掩玻璃窗操作，即使樣本再多，也能一次性順暢的完成所有切片工作。此外，它獨特的功能還有：專利可視指針標識，精準快速定位樣本；智能廢液管理系統(tǒng)，防止廢液溢出污染地面；自動休眠和喚醒，節(jié)能同時消除等待時間；樣品托標簽設計，防止弄混。