作為哺乳動物最大的器官，皮膚是動物與外界環(huán)境間最主要的物理屏障；由于生活習性和所處的外界環(huán)境不同，皮膚的功能和表面的微生物組成等都會發(fā)生變化。同時，皮膚又是獨特的免疫器官，在維持穩(wěn)態(tài)和抵抗各種病理條件時，發(fā)揮獨特的免疫功能。皮膚組織內(nèi)包含如朗格漢斯細胞、巨噬細胞、樹突細胞等多種免疫細胞。在單細胞測序應用領域，研究者往往需要對皮膚組織內(nèi)的不同細胞亞群進行分類，并在不同疾病模型下定位靶細胞，同時在進行腫瘤類研究時（如黑色素瘤和鱗狀細胞癌等）也需要對腫瘤亞型及細胞的識別。

只有制備高質(zhì)量的單細胞懸液才能保證下游實驗的順利進行，但是常規(guī)手工解離皮膚組織，不但費時，且獲得的細胞懸液碎片高，產(chǎn)量低，同時還易結(jié)團，細胞活性差，嚴重影響下游研究的開展，如單細胞測序。因此在進行皮膚組織單細胞懸液制備時，需要更加簡單快捷的方法，在提高實驗效率同時，又能保證實驗樣本的質(zhì)量。

瑞沃德單細胞懸液制備儀，通過組織處理管機械剪切，配合酶解試劑盒和內(nèi)置的處理程序及溫控系統(tǒng)，只需將樣本放入，設好程序，即可輕松獲得高質(zhì)量皮膚單細胞懸液，獲得的細胞可直接用于后續(xù)實驗，如單細胞測序、原代細胞培養(yǎng)、細胞分選等。

有了高質(zhì)量的單細胞懸液后，高效穩(wěn)定且高性價比的單細胞測序平臺將保障下游實驗結(jié)果的質(zhì)量與大規(guī)模應用的可能。達普生物Galaxy單細胞建庫平臺基于專利的微流控油包水單細胞包裹技術(shù)與微球編碼配套技術(shù)，可快速實現(xiàn) 1-4 樣本的單細胞測序文庫構(gòu)建。經(jīng)過生信分析軟件 StarScope處理后，表達矩陣結(jié)果兼容幾乎所有下游生信分析軟件，輕松得到單細胞測序?qū)嶒灁?shù)據(jù)。

下面為大家展示一下，瑞沃德單細胞懸液制備儀和達普生物單細胞建庫平臺無縫對接的樣本制備與單細胞建庫測序結(jié)果。

單細胞懸液制備

樣本：小鼠耳部皮膚、背部皮膚。

制備方法：

1. 試劑準備

使用試劑盒中配套的Buffer將酶A、B、C分別充分溶解。

2. 樣本準備

將剪下的小鼠背部皮膚置于冷PBS緩沖液中，用手術(shù)剪或手術(shù)刀的閉合圓邊尖端分離皮膚樣本后清洗3遍；耳部皮膚去除無毛部分，用鑷子將背腹側(cè)分開，用鑷子輕輕刮耳朵內(nèi)側(cè)，去除殘留軟骨，然后將皮膚切成約1cm2的組織塊。

3. 程序處理

將組織塊和酶mix放入組織處理管，安裝加熱套，運行加熱程序 “M_Skin_Heater_1”。

4. 單細胞懸液收集

程序運行結(jié)束后，用潤濕后的40 μm細胞濾器過濾細胞懸液樣本，50 mL離心管收集細胞懸液，500×g離心8min，徹底棄掉上清后，用適當緩沖液重懸后用于單細胞測序、流式細胞術(shù)或原代細胞培養(yǎng)等。

單細胞測序結(jié)果

達普生物先對上述懸液進行成像質(zhì)檢，并選取背部皮膚組織單細胞懸液，用其自主研發(fā)的Galaxy單細胞建庫平臺及配套的轉(zhuǎn)錄組試劑盒進行單細胞建庫測序。

測序結(jié)果

1）達普StarScope軟件分析結(jié)果：

2） UMAP聚類分析：

與發(fā)表文獻對比，所有細胞類群能夠mapping，比例高度相似，并且線粒體基因百分較低，證實利用達普Galaxy 對皮膚組織樣本單細胞轉(zhuǎn)錄組測序的可行性及瑞沃德單細胞懸液制備儀解離的皮膚組織樣本可直接對接達普Galaxy單細胞建庫系統(tǒng)。

以上單細胞轉(zhuǎn)錄測序結(jié)果顯示：通過瑞沃德自動單細胞懸液制備系統(tǒng)制備的皮膚組織樣本可以直接用于達普Galaxy單細胞建庫平臺，不但縮短樣本懸液制備時間，同時高質(zhì)量的懸液質(zhì)量，減少了單細胞建庫過程中樣本優(yōu)化及減少一些碎片對反轉(zhuǎn)錄的影響，保證了建庫質(zhì)量，整體上縮減了整個單細胞建庫測序周期， 驗證了瑞沃德與達普Galaxy產(chǎn)品的高兼容性。

實驗使用產(chǎn)品

瑞沃德單細胞懸液制備儀

1.標準流程，提高實驗可重復性

2.可配置加熱套實現(xiàn)自動樣品處理

3.多通道獨立工作，可同步處理不同組織，節(jié)約實驗時間

4.一機兩用，同時可進行組織勻漿

Galaxy星海單細胞測序建庫系統(tǒng)

1.性能優(yōu)：可一次性完成數(shù)百至數(shù)萬個細胞的分離，基因檢測靈敏度高。

2.上樣活：1-4 通道，可靈活選擇樣本數(shù)及細胞數(shù)量，方便快捷。

3.兼容好：文庫兼容 主流國產(chǎn)與國外測序平臺。

4.分析全：自主開發(fā)的 StarScope 生信分析軟件，可完成從原始數(shù)據(jù)到分析報告的生信分析。

5.流程活：可接駁下游流程 ，如單液滴分選。

瑞沃德 & 達普生物強強聯(lián)合

瑞沃德與達普生物在單細胞測序市場的業(yè)務上下游互補關系，瑞沃德在單細胞懸液制備領域沉積多年經(jīng)驗并組建了龐大的研發(fā)團隊，推出了單細胞懸液制備儀及配套試劑盒， 其可快速對組織樣本進行高質(zhì)量的單細胞懸液制備，上市以來廣受客戶好評，有效解決了單細胞測序中的前端組織樣本單細胞懸液制備難題，為單細胞測序建庫提供前期保障，瑞沃德與達普生物雙方強強聯(lián)合，致力于打通單細胞測序上測序儀之前的各環(huán)節(jié)關卡，保證單細胞測序質(zhì)量，共同深耕單細胞測序領域。